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CRISPR/Cas9技术
CRISPR/Cas9技术核心技术: • CRISPR/Cas9技术
CRISPR/Cas9技术

CRISPR/Cas9能够靶向基因组的特定序列,并且将DNA双链打断,引发非同源末端修复,提高同源重组修复效率。可用于基因敲除,小片段基因敲入和基因条件敲除等基因编辑。


技术一般的流程

载体构建→设计制备gRNA→微注射→出生小鼠检测→阳性小鼠获得。


技术优势或适合应用的研究

-高效率基因敲除,双gRNA策略能够删除大片段DNA,从几十bp到Mb,几乎没有长度限制。

-基因敲入严重依赖片段长度,1kb以上,敲入效率急剧下降。

-点突变等小范围基因编辑效率高。


成功案例


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图1 双gRNA切割,片段敲除基因方案设计。

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图2 两个Grna切割位点之间的~550bp基因序列被高效率敲除,相对于野生带773bp,发生敲除的鼠PCR产生~220bp的条带。